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光学仪器暗视野显微镜原理及其应用

时间:2020-12-11 14:35 来源:上海帆丽华  作者:管理员 点击次数:
 
暗视场显微镜的功能:
 
暗视镜检查是检查梅毒螺旋体的一种方法。暗视场,顾名思义,是在显微镜下,没有明亮的光线,可以很容易地观察到苍白的螺旋。该病原检测对于早期梅毒的诊断具有重要意义。
暗视野显微镜
苍白螺旋体可出现早期皮肤粘膜损伤(一期、二期霉疮)。初代梅毒苍白螺旋体多在硬下疳的硬结、溃疡分泌物及渗出液中发现,淋巴结肿大也有发现。第二期梅毒苍白螺旋体在全身血液和组织中均可检测到,但皮肤检出率为 zui。早期先天梅毒,可通过皮肤粘膜损伤处的刮片发现苍白梅毒螺旋体。Zui羊膜腔穿刺术获取孕妇羊水,用暗视野显微镜观察,可诊断先天性梅毒。
 
对在普通显微镜下看不见的小活体,采用暗场观察的方法,不对生物标本进行染色,观察其形状和轮廓。可广泛用于科学研究,教学,医疗,防疫和农牧等行业。
 
暗场显微镜实际上是暗场照明法(生物学上应用的是透射式照明中的斜射式照明法).其特征与明场相异,不是直接观察照明光,而是观察被测物体反射或衍射击光。这样,视场就成了黑暗的背景,而检测到的物体就呈现出明亮的图像。
 
依据光学上的丁道尔现象,微尘微粒在经过强光直接照射时,肉眼无法看到,这是由于光线过强、绕射现象等因素造成的,因此无法看到微尘图像。如果将光线斜射出去,由于光线的反射或衍射,尘埃颗粒看起来体积就会增大,而人眼却可以看到。暗场镜检就是利用这个原理来设计的。
 
除了采用暗场聚光镜外,暗场显微镜的结构与明场显微镜基本相同。暗场聚光镜的特征是不允许光束从下到上穿过被测物体,而是改变光线的路径,使光线斜射到被测物体上,这样就可以避免光线直接进入物镜,利用被测物体表面反光或衍射光产生的明亮图像。所以在暗场中进行镜检。仅能看到物体的存在、运动和外部形态,很难分辨其内部结构。
 
暗场显微术的优势在于能够观察到在明场下无法观察到的非常微小的物体。前面已经讨论过,在明场中心照明的油浸物体中, zui的高分辨率为0.4 um;而在暗场中,它的分辨率为0.02-0.004 um.因此,暗场显微术也就是---超显微术。
 
暗场镜检要求载玻片和盖玻片必须是无疵、无灰尘的,物镜前的透镜也必须是无灰尘的。当载玻片厚度过大时,聚光聚焦点会落在载玻片内部,到达被检物体的平面时,盖玻片厚度过大,如果使用油透镜,则会因为物镜工作距离较短,甚至无法聚焦,从而看不见或看不清被检物体。
 
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