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光学仪器显微镜的观察方式分为几种?

时间:2020-12-10 10:41 来源:上海帆丽华  作者:管理员 点击次数:
 
第一明视野观察
 
明视镜检查是大家比较熟悉的一种镜检方法,广泛用于病理检查,用来观察染色的切片,所有的显微镜都可以完成这个功能。
 
第二暗视野观察
 
黑暗视野实际上是一种黑暗领域的照明。其特征与明视野不同,不能直接观察照明光,而能观察被测物体的反射或衍射光。这样,视场就成了黑暗的背景,而检视对象就呈现出明亮的景象。
 
暗视场的原理是根据光学上的丁道尔现象,使微尘在强光直射通过时,人眼无法观察到,这是强光绕射所致。如果将光线斜射,由于光线的反射,微粒看起来体积增大,人眼可见。
 
三相差镜检方法
 
相差镜检术的发明在光学显微镜的发展过程中获得了成功,是现代显微镜技术的重大成就。人类的眼睛只能分辨出光波的波长(颜色)和振幅(亮度),而对于无色通明的生物标本,光通过时,波长和振幅几乎不变,在明场观察时,标本很难被观测到。
 
相位显微镜的基本原理是将透过样本可见光的光程差转化为幅度差,这样就提高了各结构之间的对比度,使得各结构都可以清晰地看到。光经过样品后发生折射,偏离了原始的光路径,同时被延缓为1/4λ(波长),如果再增加或减少1/4λ,光程差就变成1/2λ,两束光合轴后干涉增强,振幅增大或减小,反差增大。从结构上讲,相差显微镜与普通光学显微镜有两点不同:
 
环形光阑位于光源和聚光器之间,其作用是使通过聚光器的光线形成中空光锥,聚焦于样品。
 
2.相面板向物镜中添加了涂有氟化镁的相,可以使直射光或衍射光的相位延长1/4λ。分成两类:
 
1. A+相片:把直射光的1/4λ,两组光波合轴后相加,振幅增大,样品结构比周围介质更亮,形成亮反差(或称为负反差)。
 
2. B+相片:衍射光与1/4λ的延缓,两组光线合轴后光波相减,振幅减小,形成与周围介质相比更暗的暗反差(或正反差)
 
四微分干涉称镜检
 
在六十年代出现了微分干涉镜检术,它不仅可以观察到无色透明的物体,而且图像呈现出一种浮雕般的立体感觉,并且具有衬镜检查所无法达到的一些优点,观察到的事物更加真实。
 
微干涉称镜检是利用渥拉斯顿棱镜的特殊结构来分解光线。分离出的光束,其振动方向彼此垂直、强度相同,分别在非常接近的两点处通过被测物体,相位稍有不同。因为双光束的裂距很小,没有重影现象,所以图像具有立体感。
 
五偏光显微镜
 
偏光显微镜的特点:偏光显微镜是一种用来鉴定物质微小结构光学特性的显微镜。对所有具有双折射的物质,在偏光显微镜下可以看得很清楚,当然可以用染色的方法来观察,但是有些则不可能,偏光显微镜必须用到。晶体的基本特征是双折射。因而,偏光显微镜在矿物学、化学等方面有着广泛的应用。它同样适用于生物和植物学。
 
六浮雕相衬显微镜
 
罗伯特·霍夫曼博士1975年的发明
2002年到期后,各显微镜生产企业纷纷推出 RC技术产品。
 
原则:

斜射光在样品上产生折射,衍射,光线通过物镜密度梯度调节器产生不同的阴影,从而使透明样品的表面产生明暗差异,增加了观察的反差

 
特征:

改善未染色标本的可见性和反差度;图像显示出阴影或近似三维结构而无光晕;双折射物质(岩石切片、水晶、骨头);培养皿中细胞、器官和组织,如玻璃、塑料;聚光镜可以设计得更远; RC物镜也可用于明、暗和荧光观察
荧光显微镜荧光镜检术是利用短波长光照射被检物体,用荧光素对其进行染色,激发其产生长波长荧光,然后再观察。
 
好处:
 
检测能力强(可放大)
微小的细胞刺激(可为活体染色)
·可进行多重染色
 
目的:
 
·观察物体结构——荧光素
·有无荧光、色相比较用于物质鉴别——抗体荧光等
荧光含量的测定对物质的定性、定量分析
 
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